目前，全球已有超過1.6億人確診感染新型冠狀病毒肺炎，超過340萬死亡，嚴重危害全球公眾健康。體液免疫應答抗是抵抗新冠病毒感染主力軍之一，探究新冠病毒感染康復者體液免疫的應答機制，特別是新冠病毒特異的B細胞免疫應答情況，對新冠疫苗的設計以及相關治療性抗體的研發具有重要意義。然而，目前對特異B細胞的免疫應答了解非常有限。

研究技術路線

近日，我校公共衛生學院（深圳）陳耀慶課題組與校內多個研究組，及中科院武漢病毒所和復旦大學通力合作，對康復新冠肺炎患者的記憶B細胞和漿細胞開展了一系列研究。利用單細胞LIBRA-seq（BCR抗原特異細胞測序）測序技術，通過基因表達譜系的差異分析，研究人員發現一群獨特的活化性的記憶B細胞亞群，這群細胞高表達CD11c與CD95基因。該細胞亞群表達新冠免疫原特異的B細胞的比例顯著高于經典的記憶B細胞亞群。進一步針對抗原標記細胞的抗體亞型分布分析發現，活化性記憶B細胞亞群含有高達55.2%比例的IgG及27.5%比例的IgA，遠高于經典的記憶性B細胞亞群12.0%比例的IgG與24.1%比例的IgA。表明CD11c^hiCD95^hi活化性記憶B細胞亞群有可能在抗新冠體液免疫中扮演了重要角色。此外，研究結果揭示了新冠感染后康復者體內配對BCR譜系的多樣性和新冠特異抗體重鏈及輕鏈的非隨機配對規律，有趣的是，研究人員還發現在不同康復期患者之間存在共享克隆抗體，其輕重鏈VJ基因相同，CDR3區域高度相似（>80%）。

由于VDJ重組和體細胞超頻突變，BCR多樣性可高達10¹³，若用常規流式分選和單細胞RT-PCR，工作量巨大且效率低下且。本文章中研究人員巧妙聯合LIBRA-seq與單細胞技術，利用抗原標記量特異性，高達56%（23/41）的抗體經ELISA鑒定為SARS-CoV-2 RBD,S1,NP陽性抗體。在這一系列的RBD抗體中，通過生物學功能檢測，發現其中RBD特異人源抗體C14646P3S在體外對SARS-CoV-2活病毒具有非常強的抑制病毒復制的能力，其PRNT₅₀值為0.07μg/ml，具有發展成治療性抗體藥物的潛力。

綜上所述，研究人員利用高通量單細胞測序與LIBRA-seq技術發現了一群獨特的活化性記憶B細胞亞群(CD11c^high CD95^high)，該群細胞具有高水平的抗原標記量，對后續分析新冠B細胞應答具有潛在價值。研究人員在分析了BCR頻譜后結合LIBRA-seq能高效篩選出新冠抗原特異性抗體，并得到一個新冠RBD高活性中和抗體（PRNT₅₀=0.07μg/ml）。該研究對于在單個細胞水平洞察SARS-CoV-2感染后的B細胞免疫反應具有重要的參考價值。

該研究成果于近日在Signal Transduction and Targeted Therapy雜志以長文形式發表，論文題為“Rapid Isolation and Immune Profiling of SARS-CoV-2 Specific Memory B Cell in Convalescent COVID-19 Patients via LIBRA-seq”。陳耀慶教授為論文通訊作者，我校公共衛生學院（深圳）博士生何兵、碩士生劉舒寧及博士生王媛媛為論文共同第一作者。該研究得到了國家自然科學基金委面上項目、國家自然科學基金委新冠專項和深圳市重點研發等項目資助。

論文鏈接：https://www.nature.com/articles/s41392-021-00610-7